1. 產品說明
本產品是基于魯米諾底物的化學發光試劑盒,能夠被辣根過氧化物酶(HRP)催化發光。本試劑盒優化了底物組成,使用了新型高效增強劑,發光強度比傳統ECL顯色液提高了30-100倍,并有效地降低了背景。試劑盒使用新的氧化劑代替不穩定的雙氧水,提高了試劑盒的穩定性,室溫可穩定放置1年。工作液被HRP催化后,發出特定波長熒光(400-450 nm),可對X光膠片曝光,也可直接使用熒光CCD 掃描,主要應用于Western檢測以及化學發光免疫檢測系統。
問題
原因分析
推薦解決方案
膠片無條帶顯現或者信號較弱
轉膜的效率低
用預染色分子量標準來判斷,提高轉膜效率
抗原/抗體量少或不匹配
增加抗原/抗體量或選擇合適抗原/抗體
X光膠片有問題
X光片洗片以后應當為透明的膠片,如果全黑則說明已經完全曝光了,應當廢棄
定顯影液有問題
可以先曝光一張膠片來驗證,若有問題及時更換新的定顯影液
反應系統中HRP量過多
稀釋HRP標記物
X光膠片背景臟
一抗、二抗濃度太高
降低抗體濃度,延長封閉時間
抗體未清洗干凈
增加洗膜次數
條帶有空斑
抗原以及二抗的濃度過高
稀釋樣品重新跑膠, 也可以將混合好的顯色液冰浴后,加入到膜上,立即快速顯色
帶型不規則
轉膜時有氣泡也有可能是轉印膜沒有水化均勻
轉膜時盡量優化條件
1) 試劑盒Solution I為底物,保存于避光試劑瓶中,Solution II為氧化劑。通常取樣順序是先取底物Solution I, 換槍頭后再取氧化劑Solution II。
2) 本試劑盒較為穩定,室溫(25℃)可以保存一年以上,長期不用建議保存在2-8℃。
3) 使用生物素-親和素系統時,避免使用牛奶封閉,可能會造成背景過高。
4) 金屬氧化物顆?赡軙斐赡ど铣霈F顆粒狀斑點,避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子,可以使用平頭塑料鑷子。
5) 疊氮化鈉抑制HRP的催化能力,在緩沖液中盡量避免使用疊氮化鈉作為防腐劑。
6) 封閉、洗膜、孵育等步驟耗時較長,注意膜與塑料界面的摩擦不均勻可能造成部分位置條帶消失,可以在保鮮膜中孵育以及封閉,洗膜的塑料盒底面不要有明顯凸起,可以通過剪角的方法,區別轉印膜有蛋白的一面。
7) 不同轉印膜對蛋白的吸附能力不同,硝酸纖維素較軟,避免出現折痕。PVDF膜使用前需要使用甲醇水化均勻。
8) 勿將多張膜置于同一個洗膜盒中洗膜,相互吸附以及摩擦可能造成很深的背景。
9) 轉印、封閉、孵育都要避免氣泡。
名稱
貨號
規格
說明
Smart-ECL Basic
30020
30100
30500
10ml+10ml
50ml+50ml
250ml+250ml
基本型
Smart-ECL Enhanced
H31020
H31100
H31500
增強型
Smart-ECL Super
S32020
S32100
S32500
超敏型